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艾德莱克隆载体及突变相关产品选择指南20150315   点击次数:3911次

克隆载体相关产品选择指南:

总论:截至到2015.3.15,北京艾德莱是国内唯一同时掌握和精通XcmI制作T4快速连接载体技术,新一代TOPO拓扑异构酶载体技术,和自杀基因零背景载体技术的公司。

 

PCR产物克隆载体根据制作的原理分为两种:

一、拓扑异构酶(TOPO)原理;二、快速T4连接酶原理

每一种制作原理的PCR产物克隆载体又分为两种类型:

1. TA克隆(用于带APCR产物的克隆,例如taqLA taqtaq plus等酶扩增产物);

2. Blunt平末端克隆(用于高保真酶扩增的平末端PCR产物,如pfukodventPhusion等酶扩增的平末端产物)

 

一、拓扑异构酶(TOPO)原理的克隆载体分类:

拓扑异构酶(TOPO)原理的克隆载体

TOPO TA克隆载体

TOPO Blunt(平末端)克隆载体

CV14-Zero Background pTOPO-TA Cloning Kit (零背景TOPO TA隆,含多克隆酶切位点MCS

CV15-Zero Background pTOPO-TA Simple Cloning Kit (零背景TOPO TA克隆,不含多克隆酶切位点MCS) 

CV16-Zero Background pTOPO-Blunt Cloning Kit (零背景TOPO平末端克隆,含多克隆酶切位点MCS

CV17-Zero Background pTOPO-Blunt Simple Cloning Kit(零背景TOPO平末端克隆,不含多克隆MCS  

       

 

二、快速T4连接酶原理克隆载体分类:

快速T4连接酶原理克隆载体

TA克隆载体(Xcm I酶切)

Blunt(平末端)克隆载体(自杀基因零背景)

 CV04-pBLUE -T 载体连接试剂盒 

CV11-pBLUE -T Simple 载体连接试剂盒(不含多克隆酶切位点MCS)  

CV08-pZERO-Blunt 零背景平末端快速连接试剂盒 

CV13-pZERO-Blunt Simple 零背景平末端快速连接试剂盒(不含多克隆酶切位点MCS)

       

艾德莱PCR产物克隆载体共性:

1.      所有的载体无论是TOPO原理载体还是快速T4连接酶原理载体均可以5分钟快速连接。

2.      所有的T4连接酶原理载体都不需要蓝白斑筛选,阳性率很高,插入1000bp对照质控的时候,随机挑10个,至少有8个有插入。

3.      所有的TOPO原理载体都是真正零背景,不需要蓝白斑筛选,阳性率几乎100%,插入1000bp对照质控的时候,随机挑10个,至少有9-10个有插入。

所有艾德莱TOPO原理克隆载体优势:

本制品和传统的T4连接酶原理不同,它利用了Topoisomerase可以在瞬间(几秒钟-几分钟)、高效(接近100%)连接DNA片段的原理采用本公司独创的工艺制成。

1.     可以在瞬间(几秒钟-几分钟)完成连接。

2.     无需冰浴和热休克,室温5分钟内完成转化;无需1小时复苏,只需3710分钟复苏便可以涂板。从连接到涂板全程仅需15-20分钟。

3.     无自连、零背景,无需繁琐蓝白斑筛选,见到长出的克隆便是有插入的(接近100%)。

4.     可以连接长达10kb片段(即使连接5kb片段,挑10个菌落,至少8个是有插入的),是目前世界上最简单、最快速、零背景免筛选的TOPO TA克隆或者TOPO平末端克隆载体。

 

载体名称中Simple的含义:

载体名字中写着Simple的意思不是简化版的意思而是指不含多克隆酶切位点(MCS)的意思,就是在克隆位点两边(载体插入点)两边的载体序列没有多克隆酶切位点的意思。Simple类载体在克隆插入位点两侧不含多克隆酶切位点,如果需要做亚克隆,需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时,酶切反应将不会受到载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响,可以大大提高酶切效率,增加亚克隆成功率。

 

综上所诉总结选择指南:

客户实验目的

PCR产物仅需要测序

PCR产物测序后需要亚克隆

产物是A末端(TA克隆)

首选CV14或者CV15均可,次选CV04,效果完全可以替换或者超过宝生物的pMD18-T,全式金的pEASY T1/T3PromegapGEM-T,或者任何一家公司的TA克隆产品。

产物是平末端 (Blunt)

首选CV16或者CV17均可,次选CV08,效果完全可以替换或者超过任何一家公司的Blunt平末端克隆产品。

产物是A末端(TA克隆)

亚克隆的需求完全是客户才知道的,所有只要是亚克隆的客户,只能发下面4种产品说明书让客户自己根据需要自己选择。不懂的可询问。

可选:CV14CV15CV04CV11。在都可选的情况下,优先推荐CV14CV15

产物是平末端 (Blunt)

亚克隆的需求完全是客户才知道的,所有只要是亚克隆的客户,只能发下面4种产品说明书让客户自己根据需要自己选择。不懂的可询问。

可选:CV16CV17CV08CV13。在都可选的情况下,优先推荐CV16CV17

       

 

 

新产品:CV12 Seamless Assembly and Cloning kit 无缝拼接克隆试剂盒

制品说明:本制品不依赖于T4连接酶,不受载体和目的片段的酶切位点限制,而直接用同源重组的方法,采用特殊的重组酶可以将任意方法线性化后的载体和与其两端具有15-25bp重叠区域的PCR片段定向重组,可以快速实现1-5个片段的高效无缝克隆。

产品特点:

1.         30分钟可以将一个或者多个长、短PCR扩增片段(平端、A端均可)插入载体。

2.         不受载体和插入片段酶切位点的可用性和平端/粘性末端的限制,可以在任意位点进行克隆。

3.         无缝克隆,插入点不会引入不需要的碱基序列。

4.         高效、准确,阳性率>95%

 

点突变试剂盒:CV09-One Tube Mutagenesis Kit 一管式突变试剂盒   

 

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