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您也可以自己制作无缝克隆试剂盒---Seamless Cloning(无缝克隆)简介   点击次数:4568次

Seamless Cloning(无缝克隆)技术提供了一种新的、高效快速的基因克隆方法,只要插入的DNA片段末端与载体末端具有15-25个重叠碱基序列就可以在载体的任意位点完成克隆重组。

产品特点:

1. 30分钟可以将一个或者多个长、短PCR扩增片段(平端、A端均可)插入载体。

2. 不受载体和插入片段酶切位点的可用性和平端/粘性末端的限制,可以在任意位点进行克隆。

3. 无缝克隆,插入点不会引入不需要的碱基序列。

4. 高效、准确,阳性率>95%

无缝克隆技术严格意义不是新技术,类似于乔布斯天才的集成了现成的电子元器件造出Iphone,开创了智能手机新时代一样。美国的吉布斯在2009年首次用一个新颖的思路,将3种现有的商品化的酶组合起来,达到了无缝克隆的效果,开创了无缝克隆新时代。因此,您也可以按照吉布斯的思路亲自组装无缝克隆试剂盒,领略天才的思路。当然你也可以通过购买北京艾德莱的无缝克隆试剂盒CV1201 Seamless Assembly and Cloning kit,体会无缝克隆的妙处。 

 

 

原理说明:紫红色和绿色2个片段为需要连接的双链DNA片段,它们末端有相同的15-25个重叠序列(黑色),首先T5 exonuclease核酸外切酶切去5端的一些碱基,形成3端突出的单链,3端单链互补退火;然后Phusion高保真聚合酶补上两条单链之间的缺口(gaps);最后Taq DNA ligase将相邻的单链裂口(nicks)连接补齐。

     以上用到的三种酶NEB公司全部有商品化销售,因此,您可以DIY自己的无缝克隆试剂盒。但是艾德莱生物也提醒您,如果您不能自己表达纯化生产这些酶降低成本,那么购买这些商品化酶DIY 也会比较昂贵,不是发烧友,还是购买艾德莱生物帮您精心准备的CV1201 Seamless Assembly and Cloning kit

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